使用同位素內(nèi)標提高定量準確性
隨著質(zhì)譜技術的發(fā)展,質(zhì)譜技術的應用領域也越來越廣。由于質(zhì)譜分析具有靈敏度高，樣品用量少，分析速度快，分離和鑒定同時進行等優(yōu)點，因此，質(zhì)譜技術廣泛的應用于化學，化工，環(huán)境，能源，醫(yī)藥，運動醫(yī)學，刑事科學技術，生命科學，材料科學等各個領域。
在質(zhì)譜分析中，同位素內(nèi)標法是以穩(wěn)定同位素標記化合物作為內(nèi)標，利用待測物與內(nèi)標的響應豐度比值(峰面積比)進行線性回歸，通過對同位素豐度的準確質(zhì)譜測量和對加入的內(nèi)標準確稱量，做到對待測物的定量測定。該技術不需要對待測物進行定量分離、能有效消除基質(zhì)干擾、檢測靈敏度高等優(yōu)點，已在食品、環(huán)境、臨床、藥物等分析領域中得到廣泛應用。
我們先看下同位素內(nèi)標是如何消除基質(zhì)效應的？
首先我們來看下電噴霧電離(ESI)的原理
01第一步，溶液在噴霧毛細管形成自由的帶電霧滴。
02第二步，通過溶劑蒸發(fā)和霧滴分裂使帶電霧滴變小，這一過程反復進行，直至生成很小的帶電霧滴。
03第三步，當靜電排斥力大于引力時，很小的帶電霧滴釋放出分析物離子。
很明顯地，如果有任何干擾物質(zhì)影響了分析物在液滴表面的離子化過程或者形成了競爭，那么就會影響檢測結果的精密度和準確度，這種就是基質(zhì)效應。也有人認為基質(zhì)效應是由于干擾物和分析物共洗脫所致。這些干擾物隨樣品的不同而不同，比如有鹽、脂肪、表面活性劑和其他極性物質(zhì)等。
基質(zhì)效應不能通過傳統(tǒng)的內(nèi)標來消除，這是因為傳統(tǒng)的內(nèi)標和分析物因為樣品基質(zhì)不同，導致分析物和內(nèi)標的檢測結果大不相同，增加了檢測結果的不確定性。
但是可以通過在樣品中加入同位素內(nèi)標法來消除基質(zhì)效應，同位素內(nèi)標和分析物結構相似，因此和分析物在樣品基質(zhì)中的表現(xiàn)一樣。因此在多分析物檢測時，為每個分析物挑選合適的同位素內(nèi)標可以確保檢測結果的準確性。
那么在檢測中，我們應該如何挑選同位素內(nèi)標？
1應盡量選擇同位素豐度>98%以上的標準品。
2因為氘代產(chǎn)品容易和液相流動相溶劑中的活潑氫發(fā)生交換, 為了提高質(zhì)譜檢測的靈敏度和準確率，建議液相盡量選擇非氘代的同位素標記產(chǎn)品，如13C，15N等。
3如果選擇氘代產(chǎn)品作為內(nèi)標，需選擇質(zhì)量差大于3(D3以上)的產(chǎn)品。
4同位素取代的位置也非常重要，根據(jù)檢測方法選擇合適的同位素
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